Arrêté du 19 novembre 1987 RELATIF AUX METHODES OFFICIELLES чл. Annexe

4. Réactifs.

Tous les réactifs doivent être de qualité analytique.

L'eau utilisée pour la préparation des solutions d'enzymes et des échantillons doit être d'une pureté au moins égale à celle de l'eau bidistillée sur verre.

4.1. Solution d'hexacyanoferrate (II) de potassium.

Dissoudre 15 g d'hexacyanoferrate (II) de potassium (K4Fe(CN)6,3H2O) dans l'eau et compléter à 100 ml.

4.2. Solution de sulfate de zinc.

Dissoudre 30 g de sulfate de zinc (ZnSO4, 7H2O) dans l'eau et compléter à 100 ml.

4.3. Solution d'hydroxyde de sodium 0,1 M.

Dissoudre 4,00 g d'hydroxyde de sodium (NaOH) dans l'eau et compléter à 1 000 ml.

4.4. Tampon triéthanolamine pH 7,6.

Dissoudre 14,0 g de chlorhydrate de triéthanolamine (C6 H15 NO3, HC1). 0,25 g de sulfate de magnésium (MgSO4, 7H2O) dans environ 80 ml d'eau. Ajuster à pH 7,6 avec une solution d'hydroxyde de sodium environ 5 M. Compléter à 100 ml avec de l'eau.

Conservation quatre semaines à + 4 °C.

Réchauffer à environ 25 °C au moment de l'emploi.

4.5. Tampon citrate pH 4,6.

Dissoudre 6,9 g d'acide citrique (C6H8O7,H2O) et 9,1 g de citrate trisodique (C6 H5 Na3 O7, 2 H2O) dans environ 150 ml d'eau. Ajuster à pH 4,6 avec une solution d'hydroxyde de sodium environ 2 M.

Compléter à 200 ml avec de l'eau.

Conservation un an à + 4 °C.

4.6. b-fructosidase (5 mg/ml).

Dissoudre 10 mg de b-fructosidase dans 2 ml de tampon citrate (4.5).

Conservation un an à + 4 °C.

4.7. Solution de nicotinamide-adénine-dinucléotide-phosphate (NADP).

Dissoudre 100 mg de NADP-Na2 dans 10 ml d'eau.

Conservation un an à + 4 °C.

4.8. Solution d'adénosine-5'-triphosphate (ATP).

Dissoudre 500 mg d'ATP - Na2 H2, 3H2 O et 500 mg d'hydrogénocarbonate de sodium (NaHCO3) dans 10 ml d'eau.

Conservation quatre semaines à + 4 °C.

4.9. Hexokinase/glucose-6-phosphate-déshydrogénase (2mg HK/ml.1mg G-6-PDH/ml), en suspension dans une solution de sulfate d'ammonium 3,2 M.

Conservation un an à + 4 °C.

4.10. Phosphoglucose isomérase (P.G.I.) (2 mg/ml), en suspension dans une solution de sulfate d'ammonium 3,2 M.

L'activité spécifique de la suspension de phosphoglucose isomérase (E.C. 5.3.1.9) doit être d'au moins 350 U/mg à 25 °C avec le fructose-6-phosphate comme substrat.

Conservation un an à + 4 °C.

4.11. Solution de saccharose, glucose, fructose.

Dissoudre 10,000 g de saccharose (C12 H22 O11), 1,000 g de glucose anhydre (C6 H12 O6) et 1,000 g de fructose (C6 H12 O6) dans l'eau et compléter à 100 ml.

5. Appareillage.

Matériel courant de laboratoire, et notamment :

5.1. Balance analytique.

5.2. Bécher d'une capacité de 50 ml.

5.3. Fiole jaugée d'une capacité de 100 ml, classe B.

5.4. Pipettes de précision permettant de délivrer 2-1-0,2-0,05 et 0,02 ml.

5.5. Pipettes de 5 ml graduées au 1/10.

5.6. Entonnoir, diamètre 7 cm.

5.7. Papier filtre, diamètre 15 cm, Whatman n° 40 ou équivalent.

5.8. Film plastique étirable (Type parafilm) pour obturation des cuves.

5.9. Spectrophotomètre réglé à 340 nm et équipé de cuves de 10 mm de parcours optique.